Bilaga 1 (CNS)
Från Referensmetodik för laboratoriediagnostik
(Omdirigerad från Gramfärgning)
Till innehållsförteckningen för Referensmetodik: Infektioner i centrala nervsystemet
Bilaga 1
Detektion av bakterier i direktutstryk: Gramfärgning
Reagens
Initialfärgning
- Kristallviolett, stamlösning
- Kristallviolett 100 g
- (Merck art nr 15940)
- Etanol 96 % 750 mL
VARNING! Etanol är brandfarligt.
- Ammoniumoxalatlösning 1 %
- Di-ammonium oxalat monohydrat (pro analysi)
- Kristallviolett brukslösning
- Kristallviolett stamlösning 100 mL
- Ammoniumoxalatlösning 1 % 500 mL
- Renat vatten, ex dest. eller FRO 400 mL
- (FRO=Filtered Reversed Osmosis)
Anvisning:
Brukslösningen filtreras genom filtrerpapper innan den används.
Förvaring: Rumstempertaur
Fixering av utstryk
- Lugol, brukslösning
- Jodkristaller puriss 1 g
- Kaliumjodid (pro analysi) 2 g
- Renat vatten, ex dest. eller FRO 300 mL
Anvisning:
Lös jodkristallerna med kaliumjodiden i vatten.
Autoklaveras ej.
Förvaring: Mörk flaska i rumstemperatur
Avfärgning
- Acetonsprit
- Aceton (puriss) (KEBO art nr 2. 1015-1) 20 mL
- Etanol (96 %) 80 mL
Förvaring: Rumstemperatur
Som alternativ kan ren etanol (96 %) användas.
VARNING! Mycket brandfarligt.
Kontrastfärg
- Karbolfuchsin stamlösning
- Basiskt fuchsin 8g
- Etanol 90% 92 g
- Fenol 90% 50 g
- Renat vatten ad l000g
Hållbarhet: 3 år
Karbolfuchsin, bruksiösning: 10 mL stamlösning blandas med 90 mL renat vatten.
Förvaring: Rumstemperatur
Fixering av utstryk
- Lufttorka utstryket på en plan yta.
- Fixera över låga.
- Placera alternativt några droppar metanol på objektglaset. Låt ligga 2 min. Låt kvarvarande metanol rinna av utan att skölja och låt utstryket lufttorka igen.
Färgningsprocedur
- Flöda det fixerade preparatet med kristallviolettlösning. Låt färgen ligga kvar i 30 sek. Häll av kristallviolettlösningen. Skölj bort resterande lösning med Lugols lösning och flöda sedan med mer Lugols lösning. Låt lösningen ligga kvar i 60 sek.
- Avfärga genom att låta acetonspriten flöda över utstryket medan objektglaset hålls i lutande vinkel. Sluta när ingen mer färg lossnar. Anpassa avfärgningen till tjockleken på utstryket. Skölj försiktigt bort överflöd av spritenlacetonspriten med kranvatten.
- Kontrastfärga genom att hälla på karbolfuchsin 15 sek. Skölj försiktigt bort kontrastfärgen med kranvatten. Torka objektglaset i stående position eller använd en kommersiell objektglastorkare.
